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    鴨瘟抗體(DVEAb)ELISA檢測試劑盒

    簡要描述:

    上海臻科生物研發的鴨瘟抗體(DVEAb)ELISA檢測試劑盒具有五大優勢,優點明顯、 品質保障、 專業定制、免費代測 、服務周到 ,我司將持續創新,致力于為客戶提供更好的質量和服務。我們有激情、有理想,更有責任感,是您科研道路上的小伙伴。

    更新時間:2019-11-23

    產品型號:96T

    訪問次數:491

    品牌自營品牌供貨周期現貨
    應用領域生物產業

    鴨瘟抗體(DVEAb)ELISA檢測試劑盒

    實驗原理

    鴨瘟抗體(DVEAb)ELISA檢測試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被鴨瘟抗體(DVEAb)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鴨瘟抗體(DVEAb)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

     

    樣本處理及要求

    1.  血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
    2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
    3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

    4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

     

    需要而未提供的試劑和器材

    1. 酶標儀(450nm)
    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    3. 37℃恒溫箱
    4. 蒸餾水或去離子水

     

    試劑盒組成

     

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標板

    12孔×8條

    12孔×4條

    標準品

    0.3mL*6

    0.3mL*6

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    檢測抗體-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說明書進行稀釋

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    終止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2

    2

    說明書

    1

    1

    自封袋

    1

    1

    備注

    1.  標準品濃度依次為:24、12、6、3、1.5、0.75 ng/mL

    2.  經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

     

    注意事項

    1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
    2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
    3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
    4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
    5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
    6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
    8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
    9. 不能使用過期產品。
    10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

     

    試劑準備

    試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

     

    操作步驟

    1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
    2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
    3.   樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
    4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
    5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
    6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7.   每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

     

    實驗結果計算

     

     

    以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

     

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